le travail paye...

ENFIN, voila une semaine de travail qui se finit avec des résultats positifs, puisque mes manipulations ont réussi!!!
Pour les non initié, je vais expliquer ce que je fais ici : J'étudie les échanges de matériel génétique entre deux bactéries, l'une d'elle est la bactérie "donneuse", l'autre est la bactérie "receveuse" (la donneuse devrait  donner à la receveuse). Ce serait simple si ce n'était que ça mais on a décider de pimenté un peu les recherches.... Donc je cherche en fait a voir la différence d'efficacité de l'échange de matériel génétique (un plasmide) en fonction de la vitesse de croissance de la bactérie donneuse. Donc je m'amuse à regarder pousser ma donneuse avec différente source de carbone, puis je mélange cette souche avec une autre (la receveuse...) et je les mets sur un filtre, puis je met le filtre sur une boite de pétri et je regarde 1 ou 2 jours après au microscope si ça a pousser. Et cette semaine, ça a pousser!!!!!
Finalement, cette semaine a été longue par le travail mais bonne par les résultats, donc bilan globalement très positif..
Pas grand chose d'autre a dire autrement, le temps s'améliore et devient presque agréable à vivre.
See you

Comments

[Titia]

wouah mes felicitations...

Et dire que ma pauvre PCR ne marche toujours pas... (mais y a du mieux,j'ai 5 reponses positives sur 9!! lol)
A bientot, bonne continuation avec tes gentilles bactoss... si elles pouvaient transmettre le message a mes gentils ADN... ca serait super cool!

[Virginie]

Whaouh, et moi qui trouvait que ma conjugaison à trois partenaires avec double sélection positive et négative des receveuses était chiante ! Je revois ma position !
Bon courage, Charles !

[ledanois]

En fait, c'est pas tout a fait ça.
Dans un premier temps, je fais pousser ma bactérie donneuse et ma bactérie receveuse séparément. La donneuse avec de l'acide toluique (car elle a le plasmide TOL) et la receveuse avec de l'acide nalidixique (c'est un bactériostatique, pour la séléction futur). une fois les deux souches poussé comme je le veux, je lave mes bactéries et je prépare des mix dans des tubes eppendorf, je fais ensuite le "mating" (conjugaison) par filtration sous vide en mettant mon mix de bactérie, et après je met les filtres pendant 5 heures sur une boite de pétri sans source de carbone, ni azote, pour que rien ne pousse et que ça conjugue bien. Et 5 heure après, je met mes filtres sur une autres boites de pétri avec de l'acide toluique et de l'acide nalidixique. Ne pourrons ainsi pousser que les bactéries résistante à l'acide nalidixique possédant le plasmide TOL, les transconjugant!!
Voila, voila...

[CélineM1BCGMP]

en fait pour la conjuugaison, tu fais une coculture et après tu fais crever toutes les bactoss sauf les receveuses qui ont conjuguée? (du coup tu tue les émettrices et les receveuses non conjuguées si j ai bien suivi...)

[ledanois]

C'est le plasmide TOL, qui dégrade l'acide toluique, donc j'utilise l'acide toluique comme séléction. Sinon, la receveuse est mutante a l'acide nalidixique, ce qui permet de sélectionner les transconjugant en faisant pousser sur ABT m-tol, Nal.
Voila